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抓出污染细胞的真凶
双击自动滚屏 发布者:admin 发布时间:2016/3/30 阅读:1781次 【字体:

     细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染,那么他们污染细胞的特点分别是什么呢?怎样能够减少污染现象的发生?

1-细菌

    细菌污染常见的有大肠杆菌,葡萄球菌等。细菌污染较易发现,在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,培养液一般会在短时间内变黄,有时静置的培养液不混,稍加震荡会有很多混浊物漂起。显微镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮,有时在细胞表面及周围有大量细菌存在,细胞停止生长并有中毒表现。

处理:①在培养液中加入相应的抗生素,能够预防绝大多数的细菌污染。

2-真菌

   真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种,尤其梅雨季节快要到了,进行细胞培养时更易污染。污染细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液多不混浊,倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝,并悬浮飘荡在培养液中。

很多菌丝在高倍镜可见到有链状排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。镜下看时,要将培养瓶用酒精棉球擦干净,以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。

真菌污染后,细胞生长变慢,但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。

3-支原体

    支原体的大小介于细菌和病毒之间,是一种独立生活的微生物。对热敏感,对一般抗生素不敏感。支原体的形态多变,多吸附在细胞表面和细胞之间。电镜下观察,中心有高密度的密集颗粒,横断面与细胞微绒毛相似。

因国内的血清大多数都没有做支原体阴性检测,而支原体又是牛血清中最常见的微生物之一。支原体污染细胞后,培养液轻微发生混浊.但细胞变化不显著,随着细胞的培养会慢慢死亡。

支原体污染检测(荧光染色法):DNA和与DNA特异性结合的荧光染料结合,使得支原体的DNA着色,然后用荧光显微镜观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

解决:

1)抗生素排除法:支原体污染预防比解决好。如果不小心污染后,可加入高浓度抗生素(常规使用的5倍浓度)作用24-48小时,再换入常规培养液,但该法不保证有效。推荐用量:庆大霉素 200μg/ml ,四环素10μg/ml ,卡那霉素50μg/ml 。

2)加温除菌:支原体不耐热,可以对支原体污染的细胞热处理除菌。因高温对细胞本身也会产生一定影响,故热处理前需先进行预实验,确定对细胞影响最小而能最大程度的杀死支原体的时间。

4-黑胶虫

    黑胶虫的存在目前尚有争议,其在低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。

5-原虫

    培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。

6-病毒

    组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染。目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

7-非同种细胞污染

    即细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。

污染是细胞培养的大敌,预防和避免污染是成功培养细胞的关键之一。危机意识要贯彻实验的始终,否则不仅浪费时间,而且浪费人力、物力,甚至造成无法弥补

 


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